在結構生物學、生物制藥、蛋白質組學的前沿，科學家們不僅需要知道蛋白質“是什么”（身份），更需要精確了解它們“以何種狀態(tài)存在”——包括絕對分子質量、聚集狀態(tài)、復合物組成、構象變化等。傳統技術如SDS-PAGE（估算）、體積排阻色譜（相對測量）、質譜（需復雜前處理且在非天然條件下）各有局限。蛋白分子質量光度計的出現，提供了一種革命性的解決方案：它能在溶液中原位、無損、高精度地直接測量生物大分子的絕對分子質量，如同一臺能在納米尺度為單個蛋白分子“稱重”的超靈敏天平。

核心原理：當光與分子“互動”時蘊含的質量密碼

該技術的物理基礎是靜態(tài)光散射與折射率檢測的聯用，其核心儀器通常被稱為多角度光散射儀或與之聯用的系統。其原理優(yōu)雅而強大：

1.靜態(tài)光散射：當一束激光穿過蛋白質溶液時，蛋白質分子會使光線發(fā)生微弱的、各個方向的散射。這種散射光的強度與分子的分子量和尺寸直接相關。通過在不同角度（通常從低到高多個角度）同時檢測散射光強，可以獲得關于分子大?。ɑ剞D半徑Rg）和質量的關鍵信息。

2.折射率檢測：與光散射檢測器在線聯用的示差折光檢測器，用于精確測量蛋白質溶液的濃度。因為散射光強不僅與分子量有關，也與濃度成正比。

3.聯用色譜分離：在實際分析中，該檢測系統通常與高效液相色譜，尤其是體積排阻色譜在線聯用。SEC先根據分子流體力學體積（大小）將樣品中的不同組分（單體、聚集體、片段）在時間上分離，然后每個洗脫峰依次流經MALS和RI檢測器。

4.德拜圖與絕對分子質量計算：對于每一個洗脫的“切片”，系統同步獲得該時刻的散射光強信號和濃度信號?；诘掳莘匠?，無需依賴任何標準曲線的校準，即可直接計算出該切片中分子的絕對重均分子量。這是其最核心的優(yōu)勢——測量是絕對的、第一性的。

技術優(yōu)勢：超越傳統的“透視”能力

1.絕對測量，無需標曲：不依賴任何標準蛋白質的校準曲線，避免了因標準品與樣品結構差異帶來的誤差。這是對傳統SEC依靠保留時間推算分子量方法的根本性超越。

2.原位、無損分析：在接近天然狀態(tài)的水溶液或緩沖液環(huán)境中進行測量，保持了蛋白質的天然構象和相互作用，結果更能反映其生理狀態(tài)。

3.分辨復雜體系：能夠清晰分辨和定量樣品中的單體、二聚體、多聚體、高分子量聚集體和降解片段，并精確給出各組分的分子量和比例。這對于生物制藥中治療性蛋白（如單抗）的聚集體分析至關重要。

4.獲取形狀信息：通過分析多角度散射數據，可以計算分子的回轉半徑，從而推斷其大致構型（球狀、棒狀、無規(guī)線團等）。

5.功能強大：

?共軛物分析：精確測定抗體-藥物偶聯物中平均藥物載量。

?復合物計量學：研究蛋白質-蛋白質、蛋白質-核酸復合物的化學計量比。

?構象監(jiān)測：通過比較Rg與理論值，評估蛋白質折疊/去折疊狀態(tài)。

系統構成與應用場景

一套完整的系統通常包括：SEC色譜模塊、多角度光散射檢測器、示差折光檢測器、紫外檢測器以及功能強大的數據分析軟件。軟件可自動處理海量光散射數據，擬合出分子量分布、Rg分布，并生成專業(yè)報告。

其應用已深入生命科學的核心：

•生物藥物開發(fā)與質控：

?單克隆抗體、融合蛋白、疫苗等分子的絕對分子量確認。

?聚集體與片段分析，是放行檢驗和穩(wěn)定性研究的關鍵指標。

?糖型、ADC藥物載量分析。

•基礎研究：

?膜蛋白、多亞基蛋白復合物的化學計量與組裝研究。

?蛋白質折疊/去折疊、淀粉樣纖維化等構象變化動力學研究。

?核酸、多糖、合成高分子等生物大分子的表征。